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注射用炎琥寧的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法確認(rèn)

更新時(shí)間:2010-02-06   點(diǎn)擊次數(shù):4679次

摘要】  目的:建立注射用炎琥寧細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法。方法:按《中國藥典》2005年版(二部)附錄收載的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法及指導(dǎo)原則進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。結(jié)果:注射用炎琥寧經(jīng)1→40倍稀釋后對(duì)鱟試劑無干擾作用。結(jié)論:細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)方法可用于注射用炎琥寧的熱原檢查。

【關(guān)鍵詞】  細(xì)菌毒素 鱟試劑 炎琥寧 HtPot10恒溫金屬浴

     注射用炎琥寧具有清熱、解毒、抗炎的功能,臨床應(yīng)用于病毒性肺炎、病毒性上呼吸道感染。臨床用藥廣泛,又常用于靜脈滴注,現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)為進(jìn)行熱原檢查[1],由于細(xì)菌內(nèi)毒素檢查具有靈敏度高,操作簡便,重現(xiàn)性好的優(yōu)點(diǎn)。現(xiàn)將細(xì)菌內(nèi)毒素法代替熱原檢查法。

    1  儀器與試劑

混勻器;HtPot10恒溫金屬浴(合肥艾本森科學(xué)儀器有限公司);無熱原吸頭,微量移液器。

    細(xì)菌內(nèi)毒素工作品(CSE,效價(jià)70EU/支,批號(hào)20053,中國藥品生物制品檢定所);鱟試劑(TAL,靈敏度0.125EU/ml,批號(hào)051109,050210,湛江安度斯生物有限公司);細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水(批號(hào)200050208,含量≤0.03EU/ml,湛江海洋生物制品檢定廠);注射用炎琥寧(供試品,規(guī)格每支0.2g,批號(hào)051209、0501018、050926,哈爾濱三聯(lián)藥業(yè)有限公司)。

    2  方法與結(jié)果

    2.1  鱟試劑靈敏度(λ)復(fù)核  按細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法[2],用BET水將細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品稀釋成2、1、0.5、0.25λ4個(gè)濃度進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。結(jié)果表明,靈敏度為0.125EU/ml的鱟試劑符合規(guī)定。見表1。將表1數(shù)據(jù)代入公式λc=lg-1∑xini  λc=0.125。表1  鱟試劑靈敏度復(fù)核實(shí)驗(yàn)結(jié)果TAL內(nèi)毒素濃度(EU/ml)0.250.1250.06250.03125靈敏度(λc)051109++--0.125050210++--0.125

  2.2  注射用炎琥寧細(xì)菌內(nèi)毒素限值(L)的確定  L=K/M,式中K為規(guī)定的給藥途徑,人用每千克體重每1h可接受的內(nèi)毒素zui大劑量,注射劑的K=5.0EU/kg·h;M為人用每千克體重每1h給藥的zui大劑量,經(jīng)計(jì)算,供試品M=1.0ml/kg·h,因此細(xì)菌內(nèi)毒素理論限值為:L=K/M=5/1.0=5EU/ml。

    2.3  供試品的zui大有效稀釋倍數(shù)(MVD)  選用靈敏度為0.125EU/ml鱟試劑時(shí),MVD=Lλb=50.125=40倍。

    2.4  供試品干擾初篩試驗(yàn)  用BET水將注射用炎琥寧(批號(hào)051209)分別稀釋成原液、1→10、1→20、1→40系列濃度,以各稀釋濃度供試品將細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品稀釋成2、1、0.5、0.25λb4個(gè)濃度的內(nèi)毒素溶液,與鱟試劑混合進(jìn)行抑制/增強(qiáng)試驗(yàn),結(jié)果表明,供試品在較高濃度時(shí)對(duì)鱟試劑有干擾作用,之外,其直接毒性作用可刺激心血管、肝臟等臟器與功能,是導(dǎo)致肝細(xì)胞局灶或彌漫性壞死的主要原因。肝細(xì)胞可出現(xiàn)局灶或彌漫性壞死,門脈周圍纖維化。在供試品至少1→40稀釋后則對(duì)鱟試劑無干擾作用,

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